Análisis de Localización y Distribución de ARNm de Péptidos Antimicrobianos Expresados en Células de Camarón por Hibridación in Situ

Resumen

La presente publicación describe adaptaciones a métodos para la detección y localización de ARNmensajeros de penaeidins, péptidos antimicrobianos del camarón Penaeus vannamei, utilizandomarcadores fríos y calientes tanto para muestras correspondientes a células citocentrifugadas como paratejidos incluidos en parafina. Si se describen los procedimientos y adaptaciones para realizar lostratamientos previos a la hibridación en los cuales se determinan los pasos para desparafinar tejidos,tiempos de post fijación y tratamiento con ARNasa para preservar las condiciones de los tejidos para unabuena observación luego de la hibridación. Además, se establecen los mejores parámetros para prepararribosondas y se discuten las ventajas de la utilización de este tipo de sondas con respecto a las sondas dedoble cadena de ADN. Finalmente se determinan los pasos optimizados para realizar una hibridación ydetección de las ribosondas marcadas a la forfatasa alcalina que permitan la mejor definición ysensibilidad en las células objetivo.