https://doi.org/10.37815/rte.v37n2.1325

Artículos originales

Evaluación in vitro de fungicidas químicos para
el control de Moniliophthora roreri agente causal de la moniliasis del cacao (Theobroma cacao L.)

In vitro evaluation of chemical fungicides for the control of Moniliophthora roreri,
the causal agent of cacao frosty pod rot (Theobroma cacao L.)

Darlyn
José Amaya-Márquez1 https://orcid.org/0000-0003-4961-0283,

Danny
Daniel Avilés Párraga1  https://orcid.org/0000-0001-7829-3075, Angie Lisseth Peñaherrera-Morales2 https://orcid.org/0009-0004-8631-914X, Javier Ulises Mendoza Thompson1 https://orcid.org/0000-0002-5891-453X, Evelyn Elizabeth Sánchez Castro1 https://orcid.org/0009-0001-0502-3901, Antonio Gonzalo Álava Murillo1 https://orcid.org/0000-0002-9786-7879

1Universidad
Agraria del Ecuador, Guayaquil, Ecuador

[email-masked],
[email-masked],
[email-masked],
[email-masked],
[email-masked]

2Universidad
Católica de Santiago de Guayaquil, Guayaquil,
Ecuador

[email-masked]

Enviado:       2025/05/27

Aceptado:       2025/09/05

Publicado:
2025/12/15

Resumen

Sumario: Introducción, Materiales y Métodos, Resultados y Discusión, Conclusiones.

Como citar: Amaya-Márquez, D., Avilés, D., Peñaherrera-Morales, A., Mendoza, J.,
Sánchez, E. & Álava, A. (2025). Evaluación in vitro de fungicidas
químicos para el control de Moniliophthora roreri agente causal de la moniliasis del cacao
(Theobroma cacao L.). Revista Tecnológica - Espol, 37(2), 132-143.

https://rte.espol.edu.ec/index.php/tecnologica/article/view/1325

El cultivo de cacao
represente un rubro importante para la economía de los ecuatorianos, pues es
uno de los principales productos de exportación; sin embargo, las enfermedades
como Moniliophthora roreri
ocasionan pérdidas significativas, y su control continúa siendo un desafió para
los productores. Una de las soluciones para contrarrestar esta enfermedad es la
evaluación in vitro de fungicidas químicos, ya que permite la
caracterización de aislados fitopatógenos, y la estimación de dosis de
moléculas químicas para el manejo fitosanitario. Por esta razón, este trabajo
consistió en la evaluación de dos fungicidas a base de sulfato de cobre
pentahidratado 200, 2000 y 20000 mg·L⁻¹ y azoxystrobin
1.0, 0.1 y 0.01 mg·L⁻¹ utilizando dos aislados de M. roreri
bajo condiciones in vitro. Se utilizó un diseño completamente al
azar factorial con siete repeticiones. Se evaluó el crecimiento radial del
hongo para estimar el porcentaje de inhibición de crecimiento. Los resultados
mostraron que azoxystrobin obtuvo el PIC 100% a 1
mg·L⁻¹, y fue altamente sensible, independientemente del aislado de M. roreri, pero estadísticamente el PIC entre cepas fue
significativo. El sulfato de cobre pentahidrato
alcanzó el PIC máximo a dosis de 20000 mg·L⁻¹ clasificado como insensible y sin
diferencias entre el PIC del fungicida frente los aislados de M. roreri. Se concluye que M. roreri
es altamente sensible e insensible ante azoxystrobin
y sulfato de cobre hidratado, respectivamente. Las dosis utilizadas son la base
para analizar un número mayor de aislados y luego aplicar ensayos bajo
condiciones de campo.

Palabras
clave: Azoxystrobin, cobre, inhibición,
pentahidratado, sensibilidad.

Abstract

Cacao cultivation represents an
important sector for the Ecuadorian economy, as it is one of the country’s main
export products; however, diseases such as Moniliophthora roreri cause
significant losses, and their control continues to be a challenge for
producers. One solution to counteract this disease is the in vitro evaluation
of chemical fungicides, as it allows for the characterization of
phytopathogenic isolates and the estimation of chemical molecule dosages for
phytosanitary management. For this reason, this study consisted of evaluating
two fungicides: copper sulfate pentahydrate at 200, 2000, and 20000 mg·L⁻¹ and
azoxystrobin at 1.0, 0.1, and 0.01 mg·L⁻¹ using two isolates of M. roreri under
in vitro conditions. A completely randomized factorial design with seven
replications was used. The radial growth of the fungus was evaluated to
estimate the percentage of growth inhibition (PIC). The results showed that
azoxystrobin achieved 100% PIC at 1 mg·L⁻¹ and was highly sensitive, regardless
of the M. roreri isolate, although statistically the PIC between strains
was significant. Copper sulfate pentahydrate reached maximum PIC at a dosage of
20000 mg·L⁻¹ and was classified as insensitive, with no significant differences
in PIC between isolates of M. roreri. It is concluded that M. roreri
is highly sensitive and insensitive to azoxystrobin and copper sulfate hydrate,
respectively. The doses tested provide the basis for analyzing a larger number
of isolates and subsequently applying trials under field conditions.

Keywords: Azoxystrobin, copper, inhibition,
pentahydrate, sensitivity.

Introducción

La moniliasis del cacao, causada por Moniliophthora roreri (Evans
et al.,1978), representa una amenaza significativa para la producción de Theobroma
cacao L., generando pérdidas económicas considerables en regiones
productoras. Frente a este desafío, el uso de fungicidas como azoxystrobin y sulfato de cobre pentahidratado ha sido
evaluado como estrategia para mitigar la propagación del patógeno y mejorar el
manejo fitosanitario del cultivo (Calva, 2016; Solórzano, 2018). Contra la
enfermedad, se han examinado alternativas de manejo de M. roreri, tales como labores culturales, sensibilidad a
fungicidas, genéticas, entre otras (Amaya et al. 2021; Amaya et al. 2024). En
Ecuador, es esencial realizar estudios genéticos del patógeno, dado que
factores ambientales influyen en la resistencia y adaptación de los fitopatógenos
frente a las defensas del cacao. Se han identificado tres grupos genéticos en
el país, con una varianza molecular del 59 % entre áreas de muestreo y 40 %
dentro de ellas. El flujo génico, mediado por elementos del paisaje como
caminos y ríos, podría incidir en la expresión fenotípica del patógeno. (Phillips-Mora
et al. 2007; Rodríguez-Velázquez et al. 2024; Ren et al. 2025). En efecto,
realizar pruebas de sensibilidad a fungicidas es fundamental para estimar dosis
efectivas de fungicida, esto permitirá reducir residuos del antifúngico en
sedimentos, plantas, protozoos, entre otros, ya que los fungicidas como el azoxystrobin ejercen efectos residuales en agua y biota en
China (Zhao et al. 2024). En cuanto al sulfato de cobre pentahidratado, su uso
es amplio en la agricultura, por ejemplo, como ingrediente antifúngico,
alguicida en piscinas o lagos, suplemento en la alimentación de animales,
agente anticorrosivo, conservante de madera, insumo en aplicaciones químicas y
veterinarias, así como modulador de estrés por salinidad. Debido a esta
diversidad de aplicaciones resulta fundamental estudiar el sulfato de cobre
como fungicida, con el fin de utilizar dosis óptimas que eviten sobredosis que
afecten el ambiente y factores bióticos (Varela et al. 2003; Naghavi et al. 2023).

En el manejo de fitopatógenos, las estrobilurinas como azoxystrobin
han mostrado ser efectivos antifúngicos contra basiomicetos,
omicetos, deuteromicetos,
entre otros, el modo de acción es sistémico e inhibidor de la respiración
celular de hongos, impidiendo el crecimiento micelial (Barthett
et al. 2002; Leite et al. 2024). El sulfato de cobre
interrumpe la respiración celular e impide el crecimiento de hifas al generar
estrés oxidativo dentro de las células de los hongos, además, el efecto del
cobre contra microorganismos se atribuye a la interacción con los ácidos
nucleicos (Theophanides & Anastassopoulou,
2002; Gaetke & Chow,
2003; Zhang et al. 2024), alteración enzimática, transporte de energía e
integridad de la membrana celular de hongos (Chudzik
et al. 2013; Pscheidt & Ocamb,
2022).

A nivel in vitro se han realizado
estudios de dosis-respuesta a través de la inhibición del crecimiento micelial
o esporas de hongos fitopatógenos. Recientemente se ha determinado que azoxystrobin ejerce alta eficacia con dosis que oscila
entre 0.0008 y 0.020 mg·L⁻¹ para inhibir el 50% del crecimiento micelial (Tenegusñay, 2022); por ejemplo, en Ecuador se ha evaluado
la inhibición de diferentes cepas M. roreri
bajo diversas concentraciones de azoxystrobin y flutolanil; las dosis aplicadas permitieron determinar que
0,0001 a 0.015 mg·L⁻¹ de ingrediente activo es necesario para impedir el 50 %
de crecimiento de M. roreri, clasificado con
altamente sensible (Amaya et al. 2021; Espinoza-Lozano et al. 2022); además,
estudios en México han evidenciado alta sensibilidad de M. roreri frente azoxystrobin
combinado con hidróxido de cobre en condiciones de campo (Torres-de-la-Cruz et
al. 2019). Mientras tanto, se ha reportado que el sulfato de cobre
pentahidratado requirió dosis superiores que oscilaron entre 1000 a 4000 mg·L⁻¹
para evitar la mitad del crecimiento micelial de hongos fitopatógenos Botrytis cinerea y
Sclerotinia sclerotiorum en
pepino, aunque la cantidad efectiva del sulfato de cobre pentahidratado
disminuye 5 a 100 mg·L⁻¹ cuando se aplican en modalidad de nanopartículas de
sulfato de cobre en condiciones controladas in vivo (Zhang et al. 2024).

La investigación a nivel in vitro
resulta esencial para entender la eficacia de estos compuestos en condiciones
controladas y estimar el efecto sobre distintas cepas de M. roreri. Mediante la técnica de cultivo envenenado es
posible determinar el grado de inhibición del crecimiento micelial de los
patógenos generando información base para establecer estrategias de control más
efectivas en campo.

Por esta razón, este trabajo evaluó la
sensibilidad de dos aislados del basidiomiceto M. roreri
a fungicidas sulfato de cobre pentahidratado y azoxystrobin
en condiciones in vitro.

Materiales y Métodos

Muestreo

Se seleccionaron frutos de Theobroma
cacao L. con síntomas característicos de moniliasis, provenientes de zonas
agro-productivas de los cantones San Francisco de Milagro, en la provincia del
Guayas, y Echeandía, en la provincia de Bolívar de Ecuador. Se consideraron
únicamente aquellos frutos con síntomas de M. roreri,
en los que al menos la mitad de la superficie no presentara necrosis.
Posteriormente, estos fueron trasladados al laboratorio de Fitopatología de la
Universidad Agraria del Ecuador en Guayaquil.

Aislamiento

En condiciones de laboratorio, se procedió
al aislamiento del patógeno mediante la técnica de cultivo envenenado,
utilizando medio de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA). Previo a la siembra en
PDA se realizó un lavado y desinfección de los frutos afectados por M. roreri. Con un bisturí se cortaron fragmentos
considerando una parte sana y otra enferma del tejido y fueron sembrados en
placas de Petri, posteriormente, se incubaron a 25°C en oscuridad por 7 días,
permitiendo el desarrollo micelial de M. roreri
(Espinoza-Lozano et al., 2022) (Figura
1).

Figura 1

Aislamiento del patógeno a partir de
mazorca de cacao

Nota: En la imagen (A) se indica fruto de cacao con sintomatología de
moniliasis (B) indica fragmentos sembrados en medio PDA y (C) indica el
crecimiento exitoso de M. roreri en el medio
de cultivo a partir del tejido vegetal.

Identificación
Morfológica

Las colonias
purificadas fueron caracterizadas morfológicamente mediante observación
microscópica, evaluando parámetros como coloración, textura, crecimiento radial
y presencia de estructuras reproductivas. Para la identificación se observaron
las cualidades morfológicas como el crecimiento blanquecino, filamentos, septos
miceliales o tabique, conidios circulas o globosos; para este último se utilizó
un portaobjeto y cubreobjeto y agua destilada estéril para el montaje en el
microscopio óptico (Suarez-Contreras, 2006). Los aislados fueron conservados en
tubos eppendorf de 1,5 mL
con agua destilada estéril.

Evaluación de
sensibilidad a fungicidas

Para determinar la
respuesta del patógeno a los fungicidas, se consideró la bibliografía referente
a dosis evaluadas en estudios previos (Amaya, 2021). Una vez obtenidas las
cepas purificadas se realizaron repiques de las colonias, y se aplicó la
técnica de cultivo envenenado, incorporando concentraciones definidas de azoxystrobin 1,0, 0,1 y 0,01 mg·L⁻¹ y sulfato de cobre
pentahidratado 20000, 2000 y 200 mg· L⁻¹ en el medio de cultivo, esto se
realizó para los dos aislados de M. roreri
“MR01 (Guayas) y MR02 (Bolivar)”.

El proceso
metodológico fue el siguiente: el medio de cultivo empleado fue PDA, en
concentración de 39000 mg. L-1, esterilizado a 121ºC durante 15min-20min, a una
presión de 117,68 kPa. Una vez que la temperatura disminuyó, se incorporó el
fungicida mediante el uso de puntas de micropipeta, homogeneizándolo
adecuadamente. Posteriormente, el medio de cultivo envenenado fue dispensado en
cajas Petri estériles, con un volumen aproximado de 10 a 15 mL
por caja. Finalmente, las cajas fueron almacenadas en un lugar fresco para su
posterior uso.

Para la siembra del
inóculo en las cajas Petri, se utilizó un sacabocado de 0.5 a 1 cm de diámetro
y con un marcador se graficó un cuadrante en la parte posterior de la caja
antes de inocular con M roreri, esto se
realizó para medir el crecimiento radial del patógeno en cuatro puntos de la
caja. Una vez sembrado el inóculo, las cajas Petri fueron rotuladas e incubadas
a temperatura ambiente durante siete días. El experimento se llevó a cabo bajo
un diseño completamente al azar (DCA) factorial; el factor A fueron los
“aislados” y el factor B fueron las “dosis de fungicida”; producto de la
interacción entre estos factores se evaluaron ocho tratamientos por cada
fungicida con siete repeticiones, la unidad experimental fue una caja Petri.

Trascurrido el
periodo de incubación se midió el crecimiento (cm2) de M. roreri en los tratamientos respectivos. A partir de
estos datos se estimó el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial
(PIC) en ambas cepas, basado en la metodología de Ezziyyani
et al., (2004).

Los datos fueron
analizados mediante estadística paramétrica posterior a la verificación del
cumplimiento de independencia, normalidad y homocedasticidad. La regresión
lineal y no lineal fue ajustada acorde a la tendencia de los datos: función
lineal, polinomial, potencial. La validez del ajuste de los modelos fue basada
en el coeficiente de determinación >0.7 utilizando el software libre infostat (Di Rienzo et al., 2010)
y JASP 0.1.9.0.0 (Love et al., 2019).

Resultados
y Discusión

En el estudio de hongos fitopatógenos es
importante la identificación morfológica de los aislados obtenidos. En este
sentido, las características morfológicas macroscópicas del micelio (M. roreri) se evidenciaron como filamentosas, de crecimiento
lento, con apariencia algodonosa y blanquecino. El micelio requirió de un
periodo de 9 a 15 días para cubrir la superficie de la caja Petri y, con el
paso de los días, la apariencia de color café se intensificó, lo que sugirió la
aparición de estructuras reproductivas asexuales (Figura 2 a
y b). Las propiedades microscópicas del patógeno como micelio septado, las
conidiósporas asexuales del basidiomiceto, pueden ser observadas a partir de 6
días de incubación en un microscopio óptico a 40x de aumento, en este caso, se
evidenciaron esporas globosas o subglobosas que son
partículas del género M. roreri (Figura 2 c
y d).  La búsqueda de soluciones o
alternativas de manejo de enfermedades del cacao continúan llamando la atención
de investigadores; el estudio de esta enfermedad tiene más de 100 años
(Álvarez, Martínez & Coy, 2014) y sigue siendo un grave problema para los
cacaoteros, sobre todo, en sitios con alta humedad y temperaturas superiores a
22ºC-25ºC (Portilla-Farfan, 2018; Plasencia-Vásquez,
2022). La identificación morfológica de M. roreri
se basa en características como micelio septado, crecimiento lento y
blanquecino, conidios globosos, colonias de color café, las cuales constituyen
en propiedades discriminantes de M. roreri
(Baley 2028; Cuervo-Parra, 2011).

Figura 2

Características
morfológicas de M. roreri

Nota:
(A) indica característica macroscópica micelial de MR01 y (B) muestra el
crecimiento MR02, (C) y (D) señala conidiósporas asexuales del patógeno
respectivamente bajo la luz de un microscopio óptico.

Azoxystrobin

Se
determinó que entre los factores “aislados”, “dosis” y la interacción
“dosis-aislado” existe alta significancia estadística (p<0,01), lo cual
sugiere que el tipo de aislado y las dosis utilizadas influyen en los niveles
de inhibición micelial de M. roreri a nivel in
vitro, por lo tanto, a la hora de tomar decisiones para evaluar la eficacia
de fungicidas a nivel de laboratorio es menester que los investigadores
consideren el tipo de sensibilidad del aislado a fungicida. Las medias dentro
de los factores en estudio e interacción se muestran en la Tabla 1.

Tabla 1

Porcentaje
de inhibición de crecimiento de azoxystrobin

# Tratamientos

Aislado

Dosis (mg·L⁻¹)

1Medias

1

MR02

1

100,0 a

2

MR02

0,1

99,81 a

3

MR01

1

99,0 a

4

MR02

0,01

96,3 a

5

MR01

0,1

95,7 a

6

MR01

0,01

87,2 b

7

MR02

Control absoluto

0,0 c

8

MR01

Control absoluto

0,0 c

Coef. variación (%)

3,72

Significancia aislados

<0,0001**

Significancia dosis

<0,0001**

Significancia Aislados-dosis

0,0002**

Nota:
Medias con letras diferentes indican significancia estadística.

**,
señalan alta significancia según ANDEVA y prueba de Tukey 5%.

Con
base en lo detallado, las dosis utilizadas en este trabajo mostraron un efecto
distintivo en la inhibición de crecimiento, es decir, evidenciaron una alta
sensibilidad de M. roreri al fungicida azoxystrobin, ya que a concentraciones inferiores a 2 mg·
L⁻¹ de ingrediente activo el crecimiento in vitro de M. roreri
fue inhibido (Figura 3a). Una de las formas de
caracterizar al patógeno a nivel local y poblacional es mediante el uso de
marcadores fenotípicos, como la evaluación in vitro de fungicidas para
inhibir el crecimiento micelial o conidios de M. roreri.
En este sentido, Amaya (2021) evaluó la inhibición micelial de 79 aislados de M.
roreri a dosis de flutolanil
1, 0,1, 0,01 mg· L⁻¹ evidenciando alta sensibilidad del patógeno bajo
condiciones controladas, solo dos aislados mostraron poca sensibilidad. En este
caso, el autor concluyó que la población del basidiomiceto en el Ecuador fue
homogénea y puede ser controlada a bajas dosis. De igual forma, Espinoza-Lozano
et al, (2022) indicaron el mismo efecto de azoxystrobin
en dosis 1,0, 0,1, 0,01 mg· L⁻¹.  Estos
antecedentes coinciden con los resultados de esta investigación, pues se
determinó el efecto inhibitorio micelial utilizando las dosis 1,0, 0,1, 0,01
mg· L⁻¹ de azoxystrobin contra dos aislados de M. roreri, evidenciando la alta sensibilidad de las dos
cepas. Azoxystrobin inhibe la cadena de transporte de
electrones en la mitocondria, esto conlleva al bloqueo de sitio “citocromo b” e
impide la respiración celular. En los basidiomicetos, el fungicida interrumpe
la producción de energía, evitando el crecimiento de M. roreri
(Barthett et al., 2002).

En
países como México se ha reportado mayor concentración de ingrediente activo de
azoxystrobin 450 mg·L⁻¹ para la inhibición de
conidios y el 97% de inhibición de crecimiento micelial ha sido logrado
utilizando 1250 mg·L⁻¹ a nivel in vitro; esta resistencia puede
atribuirse al uso de agroquímicos en el manejo de enfermedades (Torres de la
Cruz et al., 2013). Así también, Quevedo (2012) evaluó dosis entre 250 a 1200
mg·L⁻¹ de azoxystrobin contra M. roreri a nivel in vitro, mostrando efecto
inhibitorio del micelio a partir de 500 mg·L⁻¹ de ingrediente activo. Si bien
este estudio, presenta limitaciones debido al análisis con dos aislados del
patógeno, estos hallazgos guardan relación con otros autores (Amaya, 2021), lo
que sugiere que nuevas investigaciones deben continuar con la caracterización
del patógeno mediante pruebas de sensibilidad con fines de monitoreo
poblacional de M. roreri.

Sulfato
de cobre pentahidratado

Este
trabajo evidenció que no existen diferencias significativas entre cepas M. roreri “aislado”, lo mismo entre la interacción
“aislado-dosis”. Sin embargo, entre dosis de sulfato de cobre pentahidratado se
mostró una alta significancia estadística (p<0,01), es así que 20000 mg·L⁻¹
de sulfato de cobre pentahidratado alcanzaron el mayor porcentaje de inhibición
del crecimiento, seguido de las dosis 2000 y 200 mg·L⁻¹, entre estos dos
últimos no hay significancia estadística (p>0,05). En la Tabla 2 se muestran las medias
aritméticas del PIC del sulfato de cobre pentahidratado. Si bien es cierto,
20000 mg·L⁻¹ demuestra inhibición total del crecimiento de patógeno a nivel in
vitro; no obstante, esto se analiza en la Figura 5 mediante modelos
predictivos de regresión.

Tabla 2

Porcentaje
de inhibición de crecimiento de sulfato de cobre pentahidratado

Dosis (mg·L⁻¹)

1Medias

20000

100,0 a

2000

22,7 b

200

22,6 b

Control absoluto

0,0 c

Coef. variación (%)

26,1

Significancia aislados

0,1842 n.s

Significancia dosis

<0,0001 **

Significancia aislados-dosis

0,1074 n.s

Nota:
Medias con letras diferentes indican significancia estadística.

**;
señalan alta significancia, según ANDEVA y prueba de Tukey 5%.

n.s: no significativo.

Figura 3

Porcentaje de inhibición de crecimiento según las dosis de azoxystrobin y sulfato de cobre pentahidratado en
condiciones in vitro

La
presente investigación también demostró que las dosis de sulfato de cobre
pentahidratado, para el manejo in vitro de M. roreri,
no deben estar por debajo de 20000 mg·L⁻¹ de ingrediente activo; este hallazgo
es crucial al momento de elegir dosis experimentales escalado a condiciones de
campo (Figura 3b). Este es el segundo
estudio que evalúa el ingrediente activo contra M. roreri in
vitro, mostrando inhibición total (PIC 100 %) a 20000 mg·L⁻¹; sin embargo,
difiere de Carrasco de la Cruz et al., (2023), quienes reportan eficacia a solo
2,5 mg·L⁻¹. Esta discrepancia podría indicar resistencia asociada al uso
prolongado de compuestos cúpricos en Ecuador. La acción del cobre se relaciona
con alteraciones en ácidos nucleicos, transporte energético y membranas
celulares (Pscheidt & Ocamb,
2022).

En
la Figura 4 se presenta la separación
de medias sin considerar el aislado M. roreri
como fuente de variación. En efecto, se evidenció la efectividad de los
fungicidas para inhibir el crecimiento de M. roreri,
independientemente de la cepa. En este sentido, destacaron todas las
dosis de azoxystrobin y la dosis más alta (p<0,01)
de sulfato de cobre pentahidratado PIC mayor a 9. El ingrediente activo azoxystrobin mostró inhibición a bajas dosis, por ello, el
patógeno es clasificado como altamente sensible. Mientras que, debido a las
altas dosis de sulfato de cobre pentahidratado, el patógeno es considerado
insensible.

Figura 4

Porcentaje de inhibición de crecimiento según fungicidas azoxystrobin y sulfato de cobre pentahidratado

Las
estrobulurinas tienen efecto inhibitorio contra
grandes grupos de hongos basidiomicetos, omicetos, deuteromicetos y ascomicetos (Barthett
et al., 2002). Los basidiomicetos, como M. roreri,
han sido reportados como moderadamente sensibles e insensibles frente a
fungicidas (Edgington, 1971). Esto coincide con el
presente estudio, pues la evaluación de modelos de regresión para estimar dosis
inhibitorias máxima de fungicidas fue aplicada a los datos PIC de los dos
aislados evaluados. Es así como se determinó que para inhibir el 100% de
crecimiento de MR01 fue necesario aplicar 19885 mg·L⁻¹ de sulfato de cobre
pentahidratado, mientras que para la inhibición máxima de MR02 se requirió al
menos 21170 mg·L⁻¹ (Figura 5a y Figura 5b). En este contexto, la
dosis necesaria de azoxystrobin para inhibir el 100%
de crecimiento fue de 1.8 mg·L⁻¹ para el aislado MR01 y 0,999 mg·L⁻¹ para MR02,
el coeficiente de determinación (r2) validó el ajuste del modelo,
explicando más de 70% de variación existente (Figura 5c y Figura 5d).

En
otras palabras, se corroboró que M. roreri se
mostró altamente sensible, según la clasificación de Edgington
(1971), con una inhibición PIC 100% utilizando 1 mg·L⁻¹ de azoxystrobin,
aproximadamente; mientras que según la sensibilidad M. roreri
al sulfato de cobre pentahidratado se requirió al menos 20000 mg·L⁻¹ para
alcanzar un PIC máximo, por lo que se lo podría considerar como insensible.
Estas aseveraciones se sugieren sean confirmadas mediante estudios futuros bajo
las mismas condiciones experimentales descritas en el presente trabajo, y debe
considerarse un mayor número de aislados. Así también, en futuros ensayos de
campo, las dosis deberían oscilar entre 100 a 200 mg·L⁻¹ de azoxystrobin
para compensar factores ambientales; y en virtud de que 20,000 mg·L⁻¹ es la
concentración letal de sulfato de cobre pentahidratado en laboratorio, en campo
se debería usar 10% a 25% de esa dosis (2000–5000 ppm), que es lo habitual en
fungicidas cúpricos con el fin de disminuir impacto en el ambiente (Molinari et al. 2024).

Figura 5

Modelo de regresión lineal y no lineal para el cálculo de dosis
máxima inhibitoria de fungicidas sulfato de cobre pentahidratado y el
antifúngico azoxystrobin

La
limitante existente en el modelo de regresión es que n=10 es el valor mínimo
con el cual se realiza regresión lineal; ciertos estudios señalan un (n) mínimo
de 30 (Carrasquilla-Batista et al. 2016). Por tanto, es necesario que estudios
posteriores incluyan un mayor número de repeticiones para sustentar mediante
predicción la dosis máxima inhibitoria que es idónea para el control de M. roreri bajo condiciones controladas.

Conclusiones

El fitopatógeno M.
roreri es altamente sensible a las dosis de azoxystrobin, pero insensible frente al sulfato de cobre
pentahidratado. Para inhibir el 100% del crecimiento micelial es necesario
aplicar al menos 2 mg·L⁻¹ de azoxystrobin, y
utilizando sulfato de cobre pentahidratado se requiere 20000 mg·L⁻¹ de
ingrediente activo aproximadamente. El presente trabajo aporta como línea de
base para ampliar las investigaciones a nivel de laboratorio empleando un mayor
número de aislados y, a la vez, fijando dosis precisas para ensayos a campo
abierto. El conocimiento de dosis efectiva contribuirá con el manejo oportuno
que impida la resistencia genética del patógeno.

Reconocimientos y
Declaraciones

Los autores declaran
la contribución y participación equitativa de roles de autoría para esta
publicación.

Parte de esta investigación se realizó en
la Universidad Agraria del Ecuador. Se reconoce la participación equitativa de
los autores en el desarrollo de la investigación presentada en esta
publicación, de la misma manera, se declara que no se ha usado inteligencia
artificial en la elaboración del presente artículo.

Referencias

Amaya-Márquez, D. J., Espinoza-Lozano, R.
F., Villavicencio-Vásquez, M. E., Sosa del Castillo, D., & Pérez-Martínez,
S. (2021). Inhibición y estimulación del crecimiento micelial de Moniliophthora roreri
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