https://doi.org/10.37815/rte.v37n1.1218
ArtÃculos originales
Virulencia de =
Phytophthora sp en brotes de cacao (Theobroma cac=
ao
L.) a nivel in vitro
Virulence of Phytophthora sp in c=
ocoa (Theobroma
cacao L.) shoots at in vitro level
Darlyn
José Amaya-Márquez1
Angie Lisseth Peñaherrera-Morales2 =
https://orcid.org/0009-0004-8631-91=
4X, Simón Ezequiel Farah Asang1 https://orcid.org/0000-0003-3245-29=
36
=
1Fac= ulta de Ciencias Agrarias, Universidad Agraria del Ecuador, Guayaquil, Ecuador<= o:p>
damaya@uagraria.edu.ec, sfarah@uagraria.edu.ec
2Uni=
versidad
Católica de Santiago de Guayaquil, Guayaq=
uil,
Ecuador
Enviado:Â Â Â Â=
  2024/07/15
Aceptado:Â Â Â Â Â Â 2025/04/29
Publicado:
    2025/06/30
Resumen
Sumario: Introducción, =
Materiales y Métodos, Resultados y Discusión, Conclusiones. Como citar:<=
/span> Amaya-Márquez, D., Peñaherrera-Morales, A. & Farah, S. (=
2025).
Virulencia de Phytophthora sp
en brotes de cacao (Theobroma cacao L.) a nivel in vitro.
Phytophthora sp<=
/span>. es
un fitopatógeno significativo que afecta frutos, tallos, hojas, brotes de =
cacao
(Theobroma cacao L.) causando considerables pérdidas en la producci=
ón.
La caracterización de cepas patógenas es de gran utilidad para optimizar =
el
manejo de la enfermedad. Por esta razón, este estudio tuvo como objetivo
evaluar la virulencia de Phytophthora
=
Pa=
labras
clave: =
Brotes, inocul=
ación,
molecular, susceptible, resistencia.
Abstract
Phytophthora sp. is a signific=
ant
phytopathogen that affects fruits, stems, leaves, and shoots of cocoa (T=
heobroma
cacao L.), causing considerable yield losses. The characterization of
pathogenic strains is very useful to optimize disease management. For this
reason, the objective of this study was to evaluate the virulence of Phy=
tophthora
sp. in cocoa shoots under controlled in vitro culture conditions. Initially=
, a
morphological characterization of Phytophthora isolates was carried =
out.
Subsequently, this phytopathogen was inoculated into disinfected shoots of =
two
cocoa varieties: Nacional fino de aroma and CCN-51, following a completely
randomized factorial design with seven replications, using the shoots as
experimental units. Phytophthora sp. is a significant phytopathogen =
that
affects fruits, stems, leaves, and shoots of cocoa, causing considerable yi=
eld
losses. The variables evaluated included incidence, severity, resistance, a=
nd
the area under the disease progress curve, which were evaluated daily for f=
our
days. Identification of the genus Phytophthora sp was performed thro=
ugh
molecular testing using internal transcribed spacer primers ITS4-ITS6. The
results showed that the incidence and severity in National Fine aroma cocoa
shoots reached 100% when infected with strain PP8, evidencing a high
susceptibility to the disease known as black pod. In contrast, CCN-51 cocoa=
shoots
did not show any infection by the strains evaluated. It is concluded that t=
he
virulence of Phytophthora sp. depends specifically on both the patho=
gen
strain and the host. These findings highlight the importance of considering=
the
phenotypic variability of the pathogen and host resistance to effectively
manage fungal diseases in cocoa crops.
Introducción
El género = Phytophthora es uno de los patógenos fúngicos que afecta gravemente las plantaciones de cacao (Theobroma cacao L.) a nivel mundial (Ferrer et al., 2022). En= el paÃs, las plantaciones de cacao están expuestos a pérdidas económicas d= ebido a la incidencia de enfermedades que afectan la producción del mismo (Abad et= al., 2018); en este sentido, es agravante la situación debido a que se ha repor= tado recientemente especies más agresivas (Phytophthora= megakarya) que P. palmivora utilizando marcadores moleculares en la caracterización (Ali et= al., 2016; Cedeño et al., 2020).  La variación poblacional que experimentan los patógenos en la búsqueda adap= tativa contra el hospedante, perjudica el manejo de enfermedades en el cacao.
Esta variabilidad patogénicaresalta la influencia del patógeno y hospedero en la magnitud del daño, lo que su= braya la necesidad de obtener nuevas estrategias para el manejo eficaz de la enfermedad, una de ellas es conocer el comportamiento de Phytophthora.
En consecuencia, es importante que = los estudios de virulencia no solo se realicen en órganos como frutos, hojas o plantas, se debe explorar el efecto en brotes de cacao (Ali et al., 2016). A pesar de que estudios en variedades de cacao comercial existen, es necesario profundizar el efecto del tipo patógeno y hospedante para entender el comportamiento del patógeno a nivel local (Ali et al., 2016).
Según Arellano (2023), evaluó la =
infección
de P. palmivora en tres variedades de ca=
cao,
el cual señaló que la variedad CCN-51 es más susceptible a la afectació=
n por
mazorca negra, y entre los menos afectados se encuentra el cacao trinitario=
. La
hipótesis de este estudio plantea que el nivel de afectación inducido por=
Phytophthora sp. p=
uede
diferir a nivel fenotÃpico entre distintos materiales de cacao sometidos a
inoculación artificial. En este contexto, se ha demostrado con eficacia qu=
e los
métodos de patogenicidad permiten evaluar la tolerancia, susceptibilidad o
resistencia de los materiales de cacao (Cedeño et al., 2020). Como parte d=
e la
investigación, se llevó a cabo una evaluación de la virulencia de la maz=
orca
negra provocada por Phytophthora sp. en brotes de cacao bajo condiciones controladas,
proporcionando información relevante para el manejo fitosanitario de la
enfermedad.
Materiales y Mét=
odos
El muestreo se realizó en plantaciones de cacao en la provinc= ia de Los RÃos, Ecuador, donde se detectaron sÃntomas de mazorca negra. A parti= r de frutos afectados, se aislaron dos cepas pertenecientes al género Phytophthora sp. La selección de muestras incluyó tanto mazorcas con necrosis como frutos san= os, los cuales fueron posteriormente trasladados al laboratorio de biotecnologÃ= a agrÃcola para su análisis y procesamiento, con el objetivo de caracteriza= r la patogenicidad del agente causal.
La desinfección de los frutos fue = hecha mediante una inmersión inicial en alcohol al 70%, seguida de un tratamient= o con hipoclorito de sodio al 2%. Posteriormente, los frutos fueron enjuagados con agua destilada estéril, garantizando la eliminación de posibles contamina= ntes superficiales y optimizando las condiciones para su análisis microbiológi= co. Se extrajeron fragmentos de 0.5 cm de la región media tanto de frutos afectad= os como sanos. Estos fragmentos fueron cultivados en placas Petri que contenÃ= an medio PDA (Potato Dextrose Agar), enriquecido c= on jugo de zanahoria al 5%, con el objetivo de favorecer el desarrollo del patógeno y facilitar su aislamiento para su posterior análisis (Ivors, 2015).
Las placas fueron incubadas a tempe= ratura ambiente 22-28ºC durante 3-4 dÃas. Cuando se observaron colonias con caracterÃsticas de Phytophthora sp. se realizaron subcultivos de puntas de hifas para obtener aislados puros en nuevas placas con el mismo medio de cultivo; Las cepas purificadas fueron conservadas para siguientes análisis. Posterior a cinco y diez dÃas de crecimiento, se evaluó la morfologÃa de las colonia= s de Phytophthora sp., = es decir, se observó la forma de las colonias (estrella y color blanco algodo= noso) y el tiempo requerido para que el patógeno cubriera toda la superficie de = las placas Petri. La identificación del tipo de micelio, esporangios y clamidosporas se realizó mediante tinción de azul de metileno y Lugol, y observación bajo un microscopio óptico a 40x.
 =
La
identificación molecular del género Phytophthora<=
/i>
sp. se hizo utilizando la técnica de Reacción=
en
cadena de la Polimerasa (PCR) con primers ITS4,
mediante el uso de primers ITS4
(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’) y ITS6 (5’-GAAGGTGAAGTCGTAACAAGG-3’). =
Para ello,
se extrajo ADN de un fragmento de micelio, raspando la superficie de la col=
onia
con un palillo estéril, y se realizó pre-tratamiento=
de ebullición a 95.9 C. La reacción de PCR se desarrolló con el siguiente
máster mix: la mezcla de reacción para la amp=
lificación
de ADN incluyó componentes clave en concentraciones especÃficas. Se emple=
ó ADN
en un rango de 1 a 3 ng/μl, acompañado de nucleótidos trifosfatados
(dNTP) a una concentración de 200 μM.
Los cebadores ITS6 e ITS4, con una concentración inicial de 10 μM, se añadieron en una proporción final de 0.4
Finalmente, se utilizó agua libre = de contaminantes para completar el volumen total de reacción, garantizando la eficiencia del proceso de amplificación de regiones ITS del ADN ribosomal = (Grünwald, 2011), y se amplió en un termociclador (B= io- Rad) siguiendo el protocolo descrito a continuación: la amplificación en el termociclador siguió una serie de pasos clave para la amplificación efici= ente del ADN. Inicialmente, se realizó la fase de desnaturalización a 94°C du= rante 3 minutos, seguida por ciclos de desnaturalización de 1 minuto a la misma temperatura. Posteriormente, se llevó a cabo 35 ciclos en los que se alter= naron la fase de alineamiento a 55°C por 1 minuto y la fase de extensión a 72°= C por 1 minuto.
Para concluir, se aplicó una exten= sión final a 72°C durante 10 minutos, garantizando la completa amplificación d= el material genético. Posteriormente, las muestras se almacenaron a -20ºC ha= sta su uso, asegurando su estabilidad para análisis posteriores (Grünwald, 2011). La presencia y tamaño de los amplicones= se verificaron mediante electroforesis en gel de agarosa al 1% con tinción de= SYBR Safe DNA (Invitrogen), y se compararon con un marcador de peso molecular (Mixed DNA Ladder, <= span class=3DSpellE>Bionner).
Los brotes de cacao de las variedad= es Nacional Fino de Aroma y CCN-51 fueron cortados a una longitud de 6.8 cm y desinfectados con hipoclorito al 5% durante dos minutos, seguido de lavados= en agua destilada estéril y secado en papel toalla estéril. Se realizó una = herida en forma de equis en la parte media de los brotes usando un bisturà estér= il y en las heridas fueron colocados fragmentos de micelio de una colonia esporu= lada de Phytophthora = sp. Los brotes inoculados se colocaron en cajas Petri estériles de 90 mm con d= os láminas de papel filtro humedecidas para crear una cámara húmeda y se in= cubaron en oscuridad. La evaluación de la virulencia se realizó diariamente duran= te cuatro dÃas (Nyassé et al., 1995). A partir del segundo dÃa, posterior a= la inoculación, se estimó el porcentaje de daño midiendo la longitud de la necrosis en los brotes. La severidad del daño se evaluó visualmente utili= zando una escala cualitativa ordinal: 0) sin sÃntomas, 1) puntos pequeños de penetración, 2) fusión de las manchas marrones, 3) lesiones grandes con p= untos coloreadas marrones obscuros, menora 4 lesiones marrones grandes y extendid= as (Nyassé et = al., 1998). La resistencia del huésped se midió siguiendo la metodologÃa de <= span class=3DSpellE>Nyassé et al., (1995); además, se estimó el área = bajo la curva del progreso de la enfermedad (ABCPE) usando la fórmula de Shaner & Finney (1977= ).
 =
El experimento utilizó un diseño =
completo
al azar de tipo factorial. El factor A constó de dos aislados del patógen=
o más
un testigo absoluto y el factor B correspondió a variedades de cacao, la u=
nidad
experimental fue un brote de cacao, en total siete repeticiones corresponde=
n a
tres tratamientos de Phytophthora sp. (dos cepas y uno sin inóculo) y el factor B a dos
variedades de cacao. Las variables calificaron los supuestos para realizar =
un
análisis estadÃstico paramétrico, por ello, se emplearon modelos lineales
generalizados mixtos y una prueba no paramétrica, utilizando el software l=
ibre Infostat versión 2020 y el software R (Di Rienzo et al., 2010).
Las caract=
erÃsticas
morfológicas coincidieron con las esperadas para el género
Figura 1=
CaracterÃsticas morfológicas de aislados de Phytophthora sp
 =
Nota:
Colonia de Phytophthora sp
in vitro. La primera fila corresponde a la cepa PP8, segunda fila cepa
PPAGR. A, B y D: crecimiento de colonia. C, E y F: Micelio y clamidospora
circular. G: Esporangio. H: esporangio y zoospora.
Caracterización molecular
La
caracterización molecular mediante la amplificación de la región ITS (
En el primer gráfico de la Figura 3<= /span> se muestra los resu= ltados de la inoculación de patógeno en los brotes de cacao según la incidencia= y severidad. En este sentido, la cepa PP8 causó una mayor incidencia y necro= sis en el cacao Nacional Fino de aroma en comparación con el CCN-51. El análi= sis de la severidad externa provocada por Phytophthora= en brotes de cacao durante un periodo de cuatro dÃas reveló que la intera= cción entre las cepas (A) y los materiales de cacao (B) tuvo un impacto significa= tivo en la magnitud del daño (p<0.001). En particular, la cepa PP8 generó u= na afectación severa en los brotes de cacao a partir del segundo dÃa de evaluación. Asimismo, los brotes de la variedad Cacao Nacional Fino de Aro= ma fueron los más perjudicados, mostrando una diferencia estadÃstica signifi= cativa (p<0.01) en comparación con el testigo absoluto, mientras que la varied= ad CCN-51 no presentó afectación por ninguna de las cepas evaluadas. =
Figura 2=
Identificación molecular de Phytophthora = palmivora
Nota: Amplificación =
por PCR primers ITS6/ITS4 fragmentos 862-941pb en 1% d=
e gel
de agarosa. Control negativo (-) PPAGR y PP8=3D Phy=
tophthora
PP3=3D Fusarium. M=3D marcador molecular
En el segundo gráfico de la Figura 3<= /span>, se observa el áre= a bajo la curva del progreso de la enfermedad con base en el tamaño diario de la nec= rosis provocada por Phytophthora en los brotes= de cacao. Esta ecuación establece que valores más elevados en el eje de las ordenadas (Y) corresponden a una mayor superficie afectada en los brotes de cacao, lo que concuerda con los resultados obtenidos en la evaluación de severidad externa. En consecuencia, el aislado PP8 ocasionó el mayor impac= to en los brotes de Cacao Nacional Fino de Aroma, con una interacción A×B que m= ostró una diferencia estadÃstica (p<0.01) altamente significativa.
Figura 3=
Evaluación de Phytophthora palmivora en brotes de cacao
|
|
|
Nota: a la izquierda se muestra la
severidad externa e incidencia de Phytophthora<=
/span>
sp. en brotes de cacao, a la derecha el área bajo la curva del progreso=
de la
enfermedad. Letras diferentes señalan diferencias significativas (p<0.0=
1).
El uso de brotes de cacao permitió estimar el grado de afectación que ejerce= Phytophthora, esto fue similar a lo señalado = por Latifah (2018), quien explicó que las hojas desprend= idas de cacao ofrecieron información importante en estudios de patogenicidad. Este estudio sostuvo que el tipo de aislado influyó en los alcances de daño en cacao, aunque CCN-51 no mostró perjuicios significativos respecto del cacao Nacional. La no correspondencia estuvo relacionada al nivel de virulencia de los aislados, según estudios, algunas cepas patogénicas expresaron mayor agresividad en ciertos huéspedes de cacao (McMahon y Purwantara, 2004). Estas aseveraciones obedecieron a = la variabilidad patogénica también reportada en otros cultivos (Boccas, 1973), asà como en huéspedes como coco, cac= ao y pimienta negra (Slamet, 1991); de tal forma, es= ta investigación sustentó que debe ser continuo el estudio de fitopatógeno = en cacao con el fin de estimar interacciones que aporten al desarrollo de nuev= as alternativas de manejo.
La estimación del efecto de patógenos como Phytophth= ora en cacao ha sido evaluado ya por un tiempo (Phillips-Mora y Galindo, 19= 89), los frutos han sido incluidos como unidad experimental y asperjados con solución de zoosporas. Nyassé et al. (1995) t= ambién señalan un estudio mediante la inoculación artificial de P. palmivora y P. megakarya<= /span> hojas, ramas no lignificadas con el fin de mediar el nivel de tolerancia a = la enfermedad.
En
este sentido, los brotes empleados en el presente estudio fueron clave para
identificar cultivares de cacao con resistencia a P=
hytophthora
sp., al tiempo que permitieron evaluar la virul=
encia
de cepas locales del patógeno, proporcionando información relevante para =
el
manejo fitosanitario de la enfermedad. De acuerdo con estos antecedentes, l=
as
plantas, y órganos del cacao pueden responder al efecto de patógenos, este
trabajo señaló que al menos uno de los aislados de <=
i>Phytophthora
sp fue virulento en brotes de cacao
Nacional, mostrando alta susceptibilidad ante el patógeno; por tanto, se a=
ceptó
la hipótesis de que existe interacción entre el tipo de aislado y hospeda=
nte.
Sin bien es cierto este estudio fue llevado a cabo bajo condiciones control=
adas
en laboratorio; sin embargo, dos aislados, dos materiales de cacao y una é=
poca
de evaluación no fueron suficientes para sostener estos hallazgos, por tan=
to,
se sugiere utilizar brotes similares en tamaño, edad, grosor e incorporar =
un
mayor número de cepas del patógeno y, finalmente, llevar el experimento en
condiciones de campo (Latifah, 2018), donde el
ambiente natural puede influir en estas aseveraciones (Nyassé
et al., 1995).
Este estudio
determinó que el tipo de aislado de Phytophthora
sp puede influir en los daños que e=
jerce
el patógeno en brotes no lignificados, los brotes de cacao Nacional fueron=
muy
susceptible a la inoculación según la incidencia y severidad de la infecc=
ión
causado por el patógeno conocido como mazorca negra. Los brotes pueden ser
usados para explorar el alcance de la enfermedad a través de la técnica de
inoculación dirigida con micelio y determinar de forma rápida la toleranc=
ia de
genotipos de cacao.
Reconocimient=
os
Se agradece a la Universidad Agrari= a del Ecuador por las instalaciones facilitadas para hacer posible la investigaci= ón.
Los autores de=
claran
que autor D.A. gestionó el financiamiento y todos los autores tuvieron una
contribución y participación equitativa de los demás roles de autorÃa p=
ara
esta publicación.
Referencias
Acurio Briones, O. K., y Montes
Villavicencio, D. J. (2020). Aplicación de los biofun=
gicidas
orgánicos en el control de la mazorca negra (Phyto=
phthora
spp.) en cultivo de cacao (Theobroma cacao) en
el cantón valencia [Universidad de Cotopaxi]. http://re=
positorio.utc.edu.ec/handle/27000/6929
Aguilar-Anccot=
a,
R., Carrasco-Espinoza, C., Morales-Pizarro, A., Yovera-Espinoza, F., &
Maldonado-Duque, E. (2020). EtiologÃa de la muerte regresiva por Phytophthora palmivora=
en el cultivo de cacao (Theobroma cacao L.). Manglar, 17(3), 187-192=
.
Aguilar, R., Carrasco, C., Morales,=
D., y
Yovera, F. (2020). EtiologÃa de la muerte regresiva por Phytophthora
palmivora en el cultivo de cacao (The=
obroma
cacao L.). Manglar. https://www.researchgate.net/publication/345102241_Etiologia_de_la_mu=
erte_regresiva_por_Phytophthora_palmivora_en_el_cultivo_de_cacao_Theobroma_=
cacao_L
Abad, M., Alvarado, A., y Gallardo, A. (2018). Análisis comparativo sobre la
incidencia de las tres principales enfermedades en el cacao CCN-51, en el
cantón La Troncal, provincia del Cañar, Ecuador. Dialnet, 12(1), 20–30.=
https://dialnet.unirioja.es/servlet/articulo?codigo=3D8278040<=
/a>
Agrosavia. (2023). Opciones tecnológicas pa=
ra el
manejo de Phytophthora en cacao. =
https://www.agrosavia.co/productos-y-servicios/oferta-tecnológica/lÃ=
nea-agrÃcola/cacao/recomendaciones-protocolos-y-metodologÃas/579-opcione=
s-tecnológicas-para-el-manejo-de-phytophthora-en-cacao
Al Tamimi, K.,
Hidayat, C., y Utami, T. (2023). Flavor prec=
ursor
formation of non-fermented forastero cocoa beans after flavourzyme®
and glucose treatment. Elsevier. https://doi.org/https://doi.org/1=
0.1016/j.lwt.2023.114910
Ali, S. S.,
Amoako-Attah, I., Bailey, R. A., Strem, M. D., Schmidt, M., Akrofi,
A. Y., Surujdeo-Maharaj, S., Kolawole, O. O., <=
span
class=3DSpellE>Begoude, B. A. D., ten Hoopen, G.
M., Goss, E., Phillips-Mora, W., Meinhardt, L. W., y Bailey, B. A. (2016).
PCR-based identification of cacao black pod causal agents and identificatio=
n of
biological factors possibly contributing to Phytophthora megakarya’s
field dominance in West Africa. Plant Pathology, 65(7), 1095–1108. https://doi.org/10.1111/ppa.12496
Amador, C.,
Alvarado, A., Farah, S., y Martillo, J. (2022). Caracterización morfológica del cacao nacional=
“Theobroma
cacao L.†del cantón Naranjal, Ecuador. Revista Tecnológica ESPOL, =
34 Núm.
4. https://doi.org/https://doi.org/10.37815/rte.v34n4.978
Antolinez, E., Almanza, P., Baraona,
A., DÃaz, E., y Serrano, P. (2020). Estado actual de la cacaocultura:
una revisión de sus principales limitantes. Ciencia y Agricultura. =
https://doi.org/https://doi.org/10.19053/01228420.v17.n2.2020.10729
Anzules-Toala<=
/span>, V., Pazmiño-Bonilla, E., Alvarad=
o-Huamán,
L., y Borjas-Ventura, R. (2022). Control of cac=
ao (Theobroma
cacao) diseases in Santo Domingo de los
Arellano Ibarra, K. V. (2023). Eval=
uación in
vitro de la infección de Phytophthora palmivora en tres materiales de cacao (Theobro=
ma
cacao L.) del litoral ecuatoriano. https://repositorio.uteq.edu.ec/items/183bfc66-667a-4c55-8616-c8d26c8=
24689
Avilés, D. (2020). Evaluación del=
potencial
de un microencapsulado en masa de Trichoderma
spp., para el biocontrol de
Moniliophthora r=
oreri
a través de ensayos in vitro e in vivo [Escuela Superior Politénica
del Litoral]. https://www.dspace.espol.edu.ec/handle/123456789/=
55227
Bowman, K.D=
.,
Albrecht, U., Graham, J.H. & Bright, D.B. 2007. Detection of Phytoph=
thora
nicotianae and P. p=
almivora
in citrus roots using PCR-RFLP in comparison with other methods. Eur. J. Pl=
ant Pathol. 119: 143-158. https://link.springer.com/article=
/10.1007/s10658-007-9135-7
Boccas, B.R=
. 1973.
Observations preliminaires sur l’héredité
du pouvoir pathogène chez
le P. palmivora (Bu=
tl.)
Butl. Cah. ORSTOM sér. Bio. 20: 51-56. Butler, E. J. (2022). Ficha técnic=
a de Phytophthora palmivora=
.
Calmon<=
/span>, R., Droguett, R., Da Silva, A., y=
Moura,
M. (2020). Especialización y competitividad: análisis de las exportaciones
brasileñas de cacao en grano y productos. Revista Mexicana de Ciencias
AgrÃcolas. https://doi.org/https://doi.org/10.29312/remexca.v11i6.2348.
Cedeño, A., Romero, R., Auhing,
J., Mendoza, A., Abasolo, F., y Cancgignia, H.
(2020). Caracterización de Phytophthora=
spp. y aplicación de rizobacter=
ias
con potencial en biocontrol de la enfermedad de=
la
mazorca negra en Theobroma cacao variedad CCN-51. Scie=
ntia
Agropecuaria, 11. Núm 4. =
https://doi.org/http://dx.doi.org/10.17268/sci.agropecu.2020.04.05
Cooke, D.E.=
L.,
Drenth, A., Duncan, J.M., Wagels, G. & Bras=
ier,
C.M. 2000. A molecular phylogeny of Phytophthora and related oomycetes. Fun=
gal
Genet. Bio. 30: 17-32.=
Chávez-Salazar, A., Cueva-Benavide=
s, A.,
Muñoz-Delgado, V., Documet-Petrlik, K., y
Vidaurre-Rojas, P. (2022). Beneficio del cacao clones CCN-51, ICS-39 y cacao
Nativo (Theobroma cacao L.). Revista Agrotecnol=
ogica
Amazonica. https://doi.org/https://doi.org/10.51252/raa.v2i1.255
David, W. P., Aguayo, A. A., Vaca, =
D. P., y
Sánchez, S. T. (2021). Manejo agroecológico de la Moniliasis en el cultiv=
o de
cacao (Theobroma cacao) mediante la utilización de bi=
ofungicidas
y podas fitosanitarias en el cantón La Troncal. Revista Alfa, 5(15),
453–468–453–468. https://d=
oi.org/10.33996/REVISTAALFA.V5I15.129
De Souza, V. R., Luz, E. D. M. N., =
Pires,
J. L., dos Santos, M. V. O., dos Santos, E., de Souza =
Rodrigues,
G., Tocafundo, F., y Neto, A. A. P. (2021). Selection o=
f cocoa
clones for resistance to Phytophthora palmivora
by artificial inoculation and natural infection in the field. Tropical Plant
Pathology, 46(4), 455–464. https://doi.org/10.1007/S40858-021-00427-3/METRIC=
S
Di Rienzo, =
J.,
Balzarini, M., Gonzalez, L., Casanoves, F., Tab=
lada,
M., & Walter Robledo, C. (2010). Infostat: software para análisis estadÃstico.
Eden, M.A.; Hill, R.A.; Galpoththage,
M. 2000. An efficient baiting assay for quantification of Phytophthora
EPPO Global
Database. (2023). Theobroma cacao. https://gd.eppo.int/taxon/THOCA
Erwin, D. C=
., &
Ribeiro, O. K. (1996). Morphology and identification of Phytophthora specie=
s. Phytophthor=
a Diseases Worldwide, 96-144.
Fernández, Y., y Lachenaud,
P. (2018). Caracterización de Phytophthora,
agente etiológico de la pudrición negra de la mazorca del cacao en Cuba y
Guyana Francesa. Centro Agricola. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=3Dsci_abstractypid=3DS0253-578=
52018000300017ylng=3Desynrm=3Diso
Ferrer-Sanchez=
,
Y., Mafaldo-Sajami, A. A., Plasencia-Vázquez, =
A. H.,
y Urdánigo-Zambrano, J. P. (2022). Riesgo para=
el
cultivo de cacao por los cambios en la distribución potencial del fitopatÃ=
³geno Moniliophthora perniciosa bajo escenari=
os de
cambio climático en Ecuador continental. Revista Terra Latinoamericana, 40,
1–10. https://doi.org/=
10.28940/terra.v40i0.1338
Gabriel, J., Fernández, S., Plata,=
G.,
& Siles, M. (2011). Niveles de resistencia al tizón tardÃo en clones =
de
papa del Centro Internacional de la Papa (CIP) evaluados en Bolivia. Revista
Latinoamericana de la Papa, 16(1), 127-141.
Guamán, M., Jaramillo, E., y Berna=
l, J.
(2022). Control biológico de la mazorca negra (Phy=
tophthora
Palmivora L.) En el cultivo de cacao (Th=
eobroma
cacao L.). Revista Metropolitana. https://remca.umet.edu.ec/index.php/REMCA/article/view/539=
Grünwald, =
N. J.,
Martin, F. N., Larsen, M. M., Sullivan, Press, C. M., Coffey, M. D., Hansen=
, E.
M., and Parke, J. L. 2011. Phytophthora-ID.org: A sequence-based Phytophthoraidentification tool. Plant Disease 95: 33=
7-342.
INIAP [Institu=
o
Nacional de Investigaciones Agrpecuarias]. (202=
0).
Informe Técnico Anual Café y Cacao. https://repositorio.iniap.gob.ec/bitstream/41000/5755/1/Informe
Anual cacao y cafe
2020.pdf
Ivors, K. L=
. (Ed.).
(2015). Laboratory protocols for Phytophthora species. The American Phytopathological Society.
Larbi, S., =
Tuyee, R., y Kanan, F. (2020). Control biológico de la enfermedad de la mazorc=
a negra
del cacao (Theobroma cacao L.) con Bacillus amyloliquefaciens, Aspergillus s=
p.
y Penicillium sp. i=
n vitro
y en el campo. Academic Jo=
rnals.
https://doi.org/https://doi.org/10.5897/JMA2020.0434
Latifah=
, M., Kamaruza=
man,
S., ABIDIN, M. Z., & Nusaibah, S. A. (2018)=
. Identificat=
ion of Phytophthora
spp. from perennial crops in Malaysia, its pathogenicity and
cross-pathogenicity. Sains Malaysiana, 47(5), 909-921.
López-Guerrero, A. (2018). Producc=
ión y
Comercialización de Cacao Fino de Aroma en el Ecuador - Año 2012-2014. https://www.scpm.gob.ec/sitio/wp-content/uploads/2019/03/ESTUDIO-DEL-=
CACAO-IZ7-version-publica-ultima.pdf
MartÃnez, E., y Pérez, L. (2018).
Incidencia de enfermedades fúngicas en plantaciones de cacao de las provin=
cias
orientales de Cuba. 30 Núm 2. https://www.researchgate.net/publication/281640130_Incidencia_de_enfe=
rmedades_fungicas_en_plantaciones_de_cacao_de_las_provincias_orientales_de_=
Cuba
McMahon, P.=
& Purwantara, A. 2004. Phytophthora on cocoa. In Divers=
ity
and Management of Phytophthora in Southeast Asia, edited by Drenth, =
A.
& Guest, D.I. ACIAR Monograph 114: 104-115.
Moreira, Ã. V. C., Meza, R. F. R.,=
Arcos,
J. A. A., León, A. F. M., Pacheco, F. A., y MartÃnez, H. F. C. (2020).
Caracterización de Phytophthora spp. y aplicación de rizobacter=
ias
con potencial en biocontrol de la enfermedad de=
la
mazorca negra en Theobroma cacao variedad CCN-51. Scie=
ntia
Agropecuaria, 11(4), 503–512. https://d=
oi.org/10.17268/SCI.AGROPECU.2020.04.05
Nyassé=
, S., Cilas, C., Herail, C., & Blaha, =
G.
(1995). Leaf
inoculation as an early screening test for cocoa (Theobroma cacao L.)
resistance to Phytophthora black pod disease. <=
span
lang=3DES-EC style=3D'font-size:10.0pt'>Crop protection, 14(8), =
657-663.
Ortega, R., y Jumbo, A. (2020).
Caracterización morfológica del cacao (Theobroma cacao L.) en la c=
uenca
del rÃo Nangaritza provincia de Zamora Chinchi=
pe
[Universidad Nacional de Loja]. https://dspace.unl.edu.ec/jspui/handle/123456789/18444
Palacios Bejarano, C., Afanador
Perrine-Wal=
ker, F.
(2020). Phytophthora palmivora-Cocoa
Interaction. Journal of Fungi (Basel, Switzerland), 6(3), 1–20.
https://doi.org/10.3390/JOF6030167
Pilay, M., =
y Galo,
S. (2023). Métodos de
fermentación en el cacao (Theobroma cacao) CCN 51 con la norma INEN=
176
en la parroquia Guasaganda, La Maná†[Univer=
sidad
Técnica de Cotopaxi]. http://re=
positorio.utc.edu.ec/handle/27000/10094
Phillips Mora, W., & Galindo, J=
. J.
(1989). Método de inoculación y evaluación de la resistencia a Phytophthora palmivora=
en frutos de cacao (Theobroma cacao). Turrialba Volumen 39, número 4
(octubre-diciembre 1989), páginas 488-496.
RamÃrez-Guillermo, M. ., Lagunes-E=
spinoza,
L., Ortiz-GarcÃa, C. F., Gutiérrez, O., y Rosa-SantamarÃa, R. (2020). Va=
riación
morfológica de frutos y semillas de cacao (Theobroma cacao L.) de
plantaciones en tabasco, México. Revista Fitotecnia Mexicana. https://doi.org/https://doi.org/10.35196/rfm.2018.2.117-125
Rodriguez Polanco, E., Parra Alferes,
E. B., Bermeo Fuquene, P. A., Segura Amaya, J. =
D., y
RodrÃguez Polanco, L. A. (2021). Manejo de la pudrición parda de la mazor=
ca (Phytophthora palmivora=
)
en cacao por aplicación conjunta de prácticas culturales y quÃmicas. Rev=
ista
Facultad de Ciencias Básicas, 16(1), 79–94. https://doi.org/=
10.18359/RFCB.4887
Sánchez, S., Crespo, G., Hernánde=
z, M.,
& GarcÃa, Y. (2008). Factores bióticos y abióticos que influyen en la
descomposición de la hojarasca en pastizales. Pastos y Forrajes,
31(2), 1-1.
Shaner, G. =
and
Finney, R. E. 1977. The effect of nitrogen fertilization on the expression =
of
slow-mildewing resistance en Knox wheat. Phytopathology. 67:1051-1056.
Simamora, A. V.,
Sinavimo. Soto, E., Mendoza, P., y Aguilar, J.
(2022). Manual de buenas prácticas agrÃcolas para el cultivo del cacao. <=
/span> Terrero Yépez, P. I., Peñaherrera
Villafuerte, S. L., SolÃs Hidalgo, Z. K., Vera Coello, D. I., Navarrete Ce=
deño,
J. B., y Herrera Defaz, M. A. (2018). In vitro compatibil=
ity of Trichoderma
spp. with fungicides commonly used in cocoa (Theobroma cacao L.). Investigación Agraria, 20(2), 146â=
€“151. Tollenaar, D. (2023). <=
i>Phytophthora
Palmivora del Cacao y su Control. Vera, J., y Vallejo, C. (2020). Atr=
ibutos
fÃsicos-quÃmicos y sensoriales de las almendras de quince clones de cacao
nacional (Theobroma cacao L.) en el Ecuador.
file:///C:/Users/Tecnoservice/Downloads/rcyt,+Gestor_a+de+la+revista,+main
(1).pdf Victorino, L., Argüello, B., RamÃ=
rez, J.,
Restrepo, S., y Cárdenas, M. (2020). Caracterización morfológica de
aislamientos de oomicetes obtenidos de Theob=
roma
cacao en el departamento del Tolima. Instname:Univ=
ersidad
de Los Andes. https://repositorio.uniandes.edu.co/handle/1992/44793 Villamil C., J. E., Sierra A., L. J=
.,
Olarte L., Y., Mosquera E., A. T., Fajardo C., J. D., Pinzón, E. H., y Mar=
tÃnez
O., J. W. (2018). Integración de prácticas culturales y control biológic=
o para
el manejo de Moniliophthora roreri Cif y Par.
5
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